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血清低密度脂蛋白(LDLC)微量法檢測(cè)試劑盒操作步驟

日期:2022-05-19瀏覽:1010次

血清低密度脂蛋白(LDLC)微量法檢測(cè)試劑盒操作步驟:

1、取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘。

2、分組:取出96孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔,1個(gè)空白對(duì)照

3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6只,依次編好號(hào)碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號(hào)的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。

4、加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

5、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

6、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

7、加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。

8、溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

9、洗板:用稀釋后的洗滌液注滿(mǎn)每孔,靜置15-30s,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干。

10、顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul。

11、終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液。

12、讀板:在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值。

注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。

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