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更新時間：2024-11-04

小鼠腦成纖維細胞

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細胞簡介：

小鼠腦成纖維分離自腦組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。每一個半球都有三個面，即外側面（約占整個皮質面積的1/3）、內側面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側面重要的溝、裂有大腦外側裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的腦成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腦成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠腦成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。

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